A biológiai kutatásokban általában hosszú szekvenciájú polipeptideket használnak.A szekvenciában több mint 60 aminosavat tartalmazó peptidek előállításához általában génexpressziót és SDS-PAGE-t használnak.Ez a módszer azonban sok időt vesz igénybe, és a végtermék elválasztási hatása nem jó.
Kihívások és megoldások a hosszú peptidszintézishez
A hosszú peptidek szintézise során mindig olyan problémával szembesülünk, hogy a kondenzációs reakció sztérikus gátlása a szintézis szekvenciájának növekedésével növekszik, és a reakcióidőt módosítani kell, hogy a reakció teljes legyen.Azonban minél hosszabb a reakcióidő, annál több mellékhatás lép fel, és a célpeptid egy része képződik.Az ilyen maradékok – a hiányos peptidláncok kulcsfontosságú szennyeződések, amelyek a hosszú peptidszintézis során keletkeznek.Ezért a hosszú peptid szintézisénél a kulcsprobléma, amit le kell küzdenünk, a jó minőségű reakciókörülmények és reakciómódszerek feltárása, hogy az aminosav-kondenzációs reakciót átfogóbbá és teljesebbé tegyük.Ezenkívül csökkentse a reakcióidőt, mert minél hosszabb a reakcióidő, annál több a kontrollálhatatlan mellékreakció, annál összetettebbek a melléktermékek.Ezért a következő három pontot foglaljuk össze:
A mikrohullámú szintézis használható: Egyes, a szintézis során előforduló aminosavak esetében, amelyeket nem könnyű integrálni, mikrohullámú szintézis használható.Ez a módszer figyelemre méltó eredményeket hoz, és nagymértékben csökkenti a reakcióidőt, és csökkenti két kulcsfontosságú melléktermék képződését.
Fragment szintézis módszer használható: Ha egyes peptideket nehéz szintetizálni szokásos szintézis módszerekkel, és nem könnyű tisztítani, akkor a peptid egy bizonyos szegmensében több aminosav teljes kondenzációját átvehetjük a peptidlánc egészére.Ezzel a módszerrel a szintézis számos problémája is megoldható.
Alkalmazható az acilhidrazid szintézis: A peptidek acilhidrazid szintézise egy módszer az N-terminális Cys peptid és a C-terminális polipeptid hidrazid szilárd fázisú szintézisére, kémiai szelektív reakció az amidkötések kialakulása között a peptidkötési módszer elérése érdekében.A Cys peptidláncban elfoglalt helyzete alapján ez a módszer a teljes peptidláncot több szekvenciára osztja, és ezeket rendre szintetizálja.Végül a célpeptidet folyadékfázisú kondenzációs reakcióval nyerjük.Ez a módszer nemcsak nagymértékben csökkenti a hosszú peptid szintézis idejét, hanem jelentősen növeli a végtermék tisztaságát is.
Hosszú peptid tisztítás
A hosszú peptidek sajátossága elkerülhetetlenül a nyers peptidek összetett komponenseihez vezet.Ezért kihívást jelent a hosszú peptidek HPLC-vel történő tisztítása is.amiloid sorozat polipeptid tisztítási folyamat, elnyeli a sok tapasztalat és sikeresen használt tisztítása hosszú peptid.Új berendezések bevezetésével, több tisztítórendszer keverésével, ismételt elválasztással és más tapasztalati módszerekkel a hosszú peptidtisztítás sikeressége jelentősen javult.
Feladás időpontja: 2023.04.18