A rekombináns fehérje antigéneknek gyakran több különböző epitópja van, amelyek egy része szekvenciaepitóp, míg néhány strukturális epitóp.Az állatok denaturált antigénekkel történő immunizálásával nyert poliklonális antitestek az egyes epitópokra specifikus antitestek keverékei, és általában felhasználhatók természetes struktúrák vagy denaturált célfehérjék kimutatására.A denaturált fehérjék immunogénként való alkalmazásának mellékes előnye, hogy a denaturált fehérjék általában immunogénebbek, és erős immunválaszt serkenthetnek állatokban.
Az Escherichia coli expressziós rendszerét általában antigén célokra választják, mivel ez a rendszer a legköltségesebb idő és pénz tekintetében.A célfehérje expressziójának lehetőségének javítása és a tisztítás megkönnyítése érdekében néha a célfehérjének csak egy kis fragmense, például egy specifikus domén expresszálódik.
A fehérjék háromdimenziós szerkezete
Egy fehérje specifikus tartománya
Ha az ellenanyag-előállítás célja kizárólag a fehérvérsejtek kimutatása, gazdaságos és gyors szintetikus kis peptidet antigénként használni, de fennáll a gyenge immunogenitás vagy nem-regenitás veszélye a peptidszegmens nem megfelelő kiválasztása miatt.Mivel az antitestek előállítása hosszú időt igényel, gyakran két vagy három különböző peptid szegmenst választanak ki az antitestek polipeptid antigén felhasználásával történő előállításához, hogy biztosítsák a kísérlet sikerességét.
Az immunizáláshoz szükséges polipeptid antigén tisztaságának 80%-nál nagyobbnak kell lennie.Habár elméletileg nagyobb tisztaságú antitesteket kaphatunk jobb specifitással, a gyakorlatban az állatok mindig nagyszámú nem specifikus antitestet termelnek, így elfedve az antigéntisztaság előnyeit.
Ezen túlmenően, az antitestek kis peptidekből történő előállítását a megfelelő hordozó antigénhez kell keresztkötni annak immunogenitásának fokozása érdekében.Két gyakori antigénhordozó a KLH és a BSA.
Feladás időpontja: 2023. március 23