Nagy pontosságú műszerként a HPLC könnyen problémákat okozhat, ha a használat során nem megfelelően kezelik.Az egyik leggyakoribb probléma az oszloptömörítési probléma.Hogyan lehet gyorsan elhárítani a hibás kromatográfot.A HPLC rendszer főként egy tartályból, egy szivattyúból, egy injektorból, egy oszlopból, egy oszlophőmérséklet-kamrából, egy detektorból és egy adatfeldolgozó rendszerből áll.Az egész rendszerben az oszlopok, a szivattyúk és az érzékelők jelentik a kulcsfontosságú alkatrészeket és a problémákra hajlamos főbb helyeket.
Az oszlopnyomás kulcsa az a terület, amelyre fokozott figyelmet kell fordítani a HPLC használatakor.Az oszlopnyomás stabilitása szorosan összefügg a kromatográfiás csúcs alakjával, az oszlop hatékonyságával, az elválasztás hatékonyságával és a retenciós idővel.Az oszlopnyomás-stabilitás nem azt jelenti, hogy a nyomásérték stabil egy stabil értéknél, hanem azt, hogy a nyomásingadozási tartomány 345 kPa vagy 50 PSI között van (lehetővé teszi a gradiens elúció használatát, ha az oszlop nyomása stabil és lassan változik).A túl magas vagy túl alacsony nyomás az oszlopnyomás problémája.
A leginkább hajlamosak a HPLC hibákra és megoldásokra
1, a magas nyomás a leggyakoribb probléma a HPLC használatában.Ez hirtelen nyomásemelkedést jelent.Általában a következő okok állnak fenn: (1) Ez általában az áramlási csatorna eltömődésének köszönhető.Ezen a ponton részenként kell megvizsgálnunk.a.Először vágja le a vákuumszivattyú bemenetét.Ekkor a PEEK-csövet megtöltötték folyadékkal úgy, hogy a PEEK-cső kisebb legyen, mint az oldószeres palack, hogy lássák, a folyadék tetszés szerint csöpög-e.Ha a folyadék nem csöpög, vagy lassan csöpög, az oldószerszűrő feje eltömődött.Kezelés: Áztasd fél órára 30%-os salétromsavba, majd öblítsd le ultratiszta vízzel.Ha a folyadék véletlenszerűen csöpög, az oldószerszűrő feje normális, és ellenőrzés alatt áll;b.Nyissa ki az öblítőszelepet, hogy a mozgófázis ne menjen át az oszlopon, és ha a nyomás nem csökken jelentősen, a szűrő fehér feje eltömődik.Kezelés: A szűrt fehér fejeket eltávolítottuk, és 10%-os izopropanollal fél órán át ultrahanggal kezeltük.Feltéve, hogy a nyomás 100 PSI alá esik, a szűrt fehér fej normális, és ellenőrzés alatt áll;c.Távolítsa el az oszlop kimeneti végét, ha a nyomás nem csökken, az oszlop eltömődik.Kezelés: Ha puffersó-elzáródásról van szó, 95%-ban öblítse le, amíg a nyomás normális lesz.Ha az elzáródást valamilyen jobban megőrzött anyag okozza, akkor a jelenlegi mozgófázisnál erősebb áramlást kell használni a normál nyomás felé rohanáshoz.Ha a tartós tisztítási nyomás a fenti módszer szerint nem csökken, akkor az oszlop be- és kimenete éppen ellenkezőleg a műszerhez csatlakoztatottnak tekinthető, és az oszlop a mozgófázissal tisztítható.Ebben az időben, ha az oszlop nyomása továbbra sem csökken, az oszlop bemeneti szitalemeze csak cserélhető, de ha a működés nem megfelelő, könnyen az oszlop hatásának csökkenéséhez vezethet, ezért próbáljon meg kevesebbet használni.Nehéz problémák esetén megfontolható az oszlopcsere.
(2) Helytelen áramlási sebesség beállítás: A megfelelő áramlási sebesség visszaállítható.
(3) Helytelen áramlási arány: a különböző arányú áramlások viszkozitási indexe eltérő, és a nagyobb viszkozitású áramlás megfelelő rendszernyomása is nagyobb.Ha lehetséges, az alacsonyabb viszkozitású oldószereket ki lehet cserélni vagy újra beállítani és előkészíteni.
(4) A rendszernyomás nulla eltolódása: állítsa be a folyadékszint-érzékelő nulláját.
2, a túl alacsony nyomást (1) általában a rendszer szivárgása okozza.Mi a teendő: Keresse meg az egyes csatlakozásokat, különösen az oszlop mindkét végén lévő interfészt, és húzza meg a szivárgási területet.Távolítsa el az oszlopot, és megfelelő erővel húzza meg vagy bélelje ki a PTFE fóliát.
(2) A gáz belép a szivattyúba, de a nyomás ekkor általában instabil, magas és alacsony.Komolyabban, a szivattyú nem fogja tudni felszívni a folyadékot.Kezelés módja: Nyissa ki a tisztítószelepet és tisztítsa 3-5 ml/perc áramlási sebességgel.Ha nem, a légbuborékokat a kipufogószelepnél szívtuk le egy erre a célra szolgáló tűcső segítségével.
(3) Nincs mozgófázis kiáramlás: ellenőrizze, hogy van-e mozgófázis a tartálypalackban, hogy a mosogató bemerül-e a mozgófázisba, és működik-e a szivattyú.
(4) A referenciaszelep nincs zárva: a referenciaszelep zárva van a lassítás után.Általában 0,1-re csökken.~ 0,2 ml/perc a referenciaszelep zárása után.
Összegzés:
Ebben a cikkben csak a folyadékkromatográfiás gyakori problémákat elemezzük.Gyakorlati alkalmazásunk során természetesen több egyéb problémával is találkozunk majd.A hibakezelés során a következő alapelveket kell követnünk: egyszerre csak egy tényezőt változtassunk, hogy meghatározzuk a hipotetikus tényező és a probléma közötti kapcsolatot;Általánosságban elmondható, hogy a hibaelhárításhoz szükséges alkatrészek cseréjekor ügyeljünk arra, hogy a leszerelt ép alkatrészeket visszahelyezzük a helyükre, hogy elkerüljük a pazarlást;A jó rögzítési szokás kialakítása a hibakezelés sikerének kulcsa.Összefoglalva, a HPLC használatakor fontos odafigyelni a minták előkezelésére, valamint a berendezés megfelelő működésére és karbantartására.
Feladás időpontja: 2023.09.18